猪繁殖和呼吸综合症诊断

大连动植物检疫局在国内**开展了PRRS的研究工作，建立了具有与**同等水平的病毒分离鉴定、间接免疫荧光试验和血清中和试验等诊断方法。其他单位也相继建立了多种酶联免疫吸附试验等。

猪繁殖和呼吸综合症是由PRRS病毒引起一种接触传染性疾病。各种年龄的猪均易感染。妊娠母猪感染后可引起流产、死胎、木乃伊胎及弱胎，仔猪可发生呼吸障碍和高病死率，其他猪常呈隐性感染或仅出现轻度的呼吸道症状。PRRS病毒欧洲型和美洲型两种主要抗原型，分别以LV和VR-2332为代表株，型间具有明显的抗原交叉反应性。据现有资料，我国流行的毒株为美洲型。本病几乎发生于世界各养猪国家，并于九十年代中期传入我国。由于其对养猪业的严重威胁性，**兽疫局已将本病例为B类传染病。

本标准是在综合我国科研成果的基础上，参照**兽疫局编写的《哺乳动物、禽和蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》编写的。其技术内容与OIE所**的基本一致。

本标准的附录A、附录B和附录C都是标准的附录。

本标准由农业部提出。

本标准起草单位：中华人民共和国大连动植物检疫局。

本标准起草人：孙颖杰、苏永生、潘凤城、孙延峰、简中友。

1 范围

本标准规定了猪繁殖和呼吸综合症的诊断方法。

本标准适用于猪繁殖和呼吸综合症的诊断。

2 诊断方法和种类和选用

PRRS的诊断方法有多种。依据临床症状和病理变化只可作出初步诊断，确诊必须依靠实验室检查。目前已建立和应用的实验室诊断技术有病毒的分离与鉴定、免疫过氧化物酶单闶匝椋?IPMA）、间接免疫荧光试验、间接酶联免疫吸附试验和血清中和试验等。病毒的分离与鉴定多用于急性病例的确诊和新疫区的确定。其余4种方法主要用于检测PRRS病毒抗体。IPMA、IFA和间接RLISA三者特异性相似，但以间接ELISA的敏感性*高。应用这三种方法一般不易区别病毒的抗原类型，故多适用于确定病性。SN反应具有明显的抗原型别差异，因此，它既适用于确定病性，也适用于鉴定病毒的抗原类型。中和抗体出现*晚，不适合于早期诊断。

本标准指定上述五种实验室诊断技术为我国进出境和国内生猪PRRS的诊断方法，**了我国对PRRS的诊断与国外的一致性。在实际应用时，可根据需要和条件，从中选用1~2种方法即可。

3 病毒的分离与鉴定

3.1材料准备

3.1.1器材：96孔细胞培养板、微量移液器、恒温水浴箱、二氧化碳恒温箱、普通冰箱及低温冰箱、离心机及离心管、组织研磨器、孔径0.2μm的微孔滤膜、普通光学显微镜。

3.1.2试剂：RPMI1640营养液、犊牛血清、青霉素与链毒素溶液、7.5%碳酸氢钠溶液等。

3.1.3细胞培养物：猪原代肺泡*噬细胞培养物或MARC-145或HS2H细胞。PAM由无PRRS猪获取，并经批次检验合格，制备和检验方法见附录B。MARC-145或HS2H细胞由****单位提供。